不少朋友在為中秋前的zui后一次實(shí)驗(yàn)仔細(xì)預(yù)備著，而在實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中大大小小的問(wèn)題總會(huì)遇到一些。今天上午，一位來(lái)自上?？蒲兴目蛻?hù)孫教師來(lái)電與我公司技術(shù)專(zhuān)員交流ELISA實(shí)驗(yàn)問(wèn)題。在交流的過(guò)程中，孫教師標(biāo)明：
 “做定量要驗(yàn)證試劑盒的線(xiàn)性規(guī)劃，現(xiàn)在我的盒子線(xiàn)性規(guī)劃太窄，線(xiàn)性區(qū)間的高點(diǎn)與低點(diǎn)的濃度值比值為16。我檢驗(yàn)了改動(dòng)反應(yīng)方式，將線(xiàn)性規(guī)劃略擴(kuò)寬了一些——線(xiàn)性區(qū)間的高點(diǎn)與低點(diǎn)的濃度值比值為32。假設(shè)高點(diǎn)往上一個(gè)梯度延伸，則R平方就只有0.96（已經(jīng)是的成果了）。總的來(lái)說(shuō)線(xiàn)性規(guī)劃仍是太窄。我參看了其他一些廠家的ELISA定量試劑盒，基本上線(xiàn)性區(qū)間的高點(diǎn)與低點(diǎn)的濃度值比值都≥64。我知道，ELISA的信號(hào)值規(guī)劃窄，但我想線(xiàn)性區(qū)間的高點(diǎn)與低點(diǎn)的濃度值比值≥64應(yīng)該仍是可以的。那么怎樣才能將試劑盒的線(xiàn)性規(guī)劃擴(kuò)寬？"
 對(duì)此，研域(上海)技術(shù)專(zhuān)員分析解說(shuō)到：試劑盒的線(xiàn)性規(guī)劃影響的首要要素應(yīng)該是抗體本身的性質(zhì)，其次才是ELISA反應(yīng)的各種條件。假設(shè)在優(yōu)化了各種反應(yīng)條件下線(xiàn)性規(guī)劃仍是很窄，只能說(shuō)制的抗體不是很好。而線(xiàn)性規(guī)劃的影響有兩個(gè)要素，*個(gè)可能要素是本身抗體的親和力，親和力越高靈敏度越高，高點(diǎn)與低點(diǎn)比值也就越高，若規(guī)范曲線(xiàn)的斜率接近于1，抗體親和力仍是可以的。比值沒(méi)有相關(guān)規(guī)定說(shuō)一定要高于64。
 第二個(gè)可能要素是本身抗原的影響。不同的蛋白ELISA其靈敏度都不相同，線(xiàn)性規(guī)劃也不同，假設(shè)你的項(xiàng)目在某一濃度抵達(dá)途徑值，說(shuō)明這個(gè)蛋白與其抗體結(jié)合與解離在此濃度下抵達(dá)了平衡，改動(dòng)其他條件也無(wú)法增加，除非改用化學(xué)發(fā)光法。若是同一種蛋白其線(xiàn)性規(guī)劃沒(méi)有其他盒子做的高，可檢驗(yàn)改動(dòng)條件下降其布景值然后下下降濃度來(lái)前進(jìn)比值。
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