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一文帶您了解免疫親和柱的操作方法

閱讀:2352      發(fā)布時(shí)間:2022-3-3
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  毒素(Tetrodotoxin,TTX)是豚魚類(俗稱河豚魚)及其它生物體內(nèi)含有的一種生物堿(氨基全氫喹唑啉型化合物),是自然界中所發(fā)現(xiàn)的毒性至大的神經(jīng)毒素之一。其毒性比劇毒還要高1250多倍,0.5mg即可致人于死命。
  免疫親和柱可選擇性吸附樣品液中的毒素,從而對(duì)樣品起到非常針對(duì)性的純化作用,過柱凈化后的樣品液可直接用于HPLC分析。它與HPLC配合使用可達(dá)到快速測(cè)定的目的,以改善信噪比,提高檢測(cè)方法的準(zhǔn)確度。
  測(cè)定的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng),抗體連接在柱體內(nèi),樣品經(jīng)過提取、稀釋,緩慢的通過免疫親和柱,在柱內(nèi)毒素與抗體結(jié)合,之后洗滌免疫親和柱除去沒有被結(jié)合的其他無關(guān)物質(zhì)。用洗脫液洗脫毒素,然后注入到分析儀器中用于檢測(cè)。
  下面咱們來了解下免疫親和柱的操作方法:
  1、取出本產(chǎn)品,將注射器筒的下端直接穿透親和柱上方的塞子,完成柱筒與柱的連接,將其放置在氣控操作架上進(jìn)行固定,去掉親和柱下方堵頭,排盡柱內(nèi)保存液。
  2、取10mL的待上樣液,注入到注射器筒中。
  3、調(diào)節(jié)開關(guān),使液體以1~2滴/秒的速度流出。
  4、待液體排干,用10mL蒸餾水洗滌1次,流速2~3滴/秒。
  5、待液體排干,往柱管內(nèi)加入2mL洗脫液,堵上親和柱堵頭靜置2min,用試管收集洗脫液,流速1滴/秒,再加入2mL洗脫液,收集洗脫液,待液體排干后,將洗脫液于40℃下氮?dú)獯抵两?,用流?dòng)相定容至1mL。
  6、混勻后用0.22μm濾器過濾至樣品瓶進(jìn)行液相檢測(cè)。
  7、使用前,需回至室溫(22~25℃)。
  8、每次上樣前都要將柱內(nèi)上次液體*排干。

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