產(chǎn)品名稱:人皮膚T細胞虜獲趨化因子(CTACK/CCL27)ELISA Kit 規(guī)格:原裝/96T ELISA試劑盒 分裝 48T/96T ELISA試劑盒 實驗原理: 案例分析:人BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導蛋白(Bid) 本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導蛋白(Bid)水平。用純化的人BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導蛋白(Bid)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導蛋白(Bid),再與HRP標記的BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導蛋白(Bid)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導蛋白(Bid)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導蛋白(Bid)濃度。 樣本處理及要求: 1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心。操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。 2. 血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)去除顆粒。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。 3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。 4. 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。 5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?/span>2 6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于 7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。 試劑盒組成: 1 20倍濃縮洗滌液 30ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶 2 酶標試劑 6ml×1瓶 8 標準品(180 ng/L) 0.5ml×1瓶 3 酶標包被板 12孔×8條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1瓶 4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份 5 顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張 6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個
注意事項:
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔OD值的),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 嚴格按說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
6.本試劑不同批號組分不得混用。
7.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.底物請避光保存。
安全性:
1. 避免直接接觸終止液和底物。如不小心接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
2. 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3. 不要用嘴接觸試劑盒里的任何成份。
4 Elisa試劑盒請遠離兒童
自備物品:
1 、 37 ℃ 恒溫箱
2 、 標準規(guī)格酶標儀
3 、 精密移液器及一次性吸頭
4 、 蒸餾水
5 、 一次性試管
6 、 吸水紙
保存條件及有效期:
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個月
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