ELISA法

光度酶聯(lián)免疫分析常被稱為ELISA法，即酶聯(lián)免疫吸附分析。它zui早由Engvall和Perlmann與Van Weeman和Schuurs同時建立，并用于醫(yī)學(xué)研究。它利用酶標(biāo)記物同抗原抗體復(fù)合物的免疫反應(yīng)與酶的催化放大作用相結(jié)合，既保持了酶催化反應(yīng)的敏感性，又保持了抗原抗體反應(yīng)的特異性，因而極大地提高了靈敏度。同時它又是一種非均相分析，即在反應(yīng)中的每一步都有洗滌過程，從而除去了未反應(yīng)物質(zhì)和干擾物質(zhì)。

ELISA是將抗原、抗體的免疫反應(yīng)和酶的催化反應(yīng)有機(jī)結(jié)合而發(fā)展起來的一種綜合性技術(shù)。它的基本原理是：使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性；抗原或抗體與某種酶聯(lián)結(jié)成美標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體即保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測定時，使受檢標(biāo)本和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開，zui后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色產(chǎn)反應(yīng)的深淺進(jìn)行定性分析或定量分析。由于酶的催化效率很高，往往一分子酶在1min內(nèi)可催化數(shù)十萬及至上千萬分子底物變?yōu)楫a(chǎn)物，故可極大地放大反應(yīng)信號，從而使測定方法達(dá)到很高的靈敏度。從以上的原理可知，整個ELISA試驗可分為三個部分：一是免疫學(xué)反應(yīng)過程，包括抗原、抗體、酶標(biāo)記物之間的反應(yīng)；二是酶和底物反應(yīng)過程，可以使用不同的酶/底物系統(tǒng)；三是檢測方法的建立，可以利用已經(jīng)存在的各種分析手段，對酶催化反應(yīng)產(chǎn)生的產(chǎn)物進(jìn)行定量分析，根據(jù)產(chǎn)物的理化性質(zhì)，可采用分光光度法，也可采用熒光分析法、化學(xué)發(fā)光分析法、電化學(xué)分析法等分析方法。