亚洲一二三四五区电影,最近中文字幕免费视频一,久久99精品久久久学生,午夜精品久久久久久久99av

上海研謹(jǐn)生物科技有限公司

當(dāng)前位置:首頁(yè)   >>   資料下載   >>   琥珀酸脫氫酶(SDH)試劑盒說(shuō)明書

琥珀酸脫氫酶(SDH)試劑盒說(shuō)明書

時(shí)間:2020/3/19閱讀:1182
分享:
  • 提供商

    上海研謹(jǐn)生物科技有限公司
  • 資料大小

    113.7KB
  • 資料圖片

  • 下載次數(shù)

    220次
  • 資料類型

    PDF 文件
  • 瀏覽次數(shù)

    1182次
點(diǎn)擊免費(fèi)下載該資料

琥珀酸脫氫酶(Succinate Dehydrogenase,SDH)試劑盒說(shuō)明書

微量法

正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義

SDH(EC 1.3.5.1)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中。SDH是線粒體的一種標(biāo)志酶,位于線粒體內(nèi)膜上的一種膜結(jié)合酶,是連接呼吸電子傳遞和氧化磷酸化的樞紐之一。

此外,為多種原核細(xì)胞產(chǎn)能的呼吸鏈提供電子。

測(cè)定原理

SDH 催化琥珀酸脫氫生成延胡索酸,脫下的氫通過(guò)吩嗪二甲酯硫酸(PMS)傳遞還原2,6-

二氯酚靛酚(DCPIP),并且在600nm 處具有特征吸收峰,通過(guò)600nm吸光度的變化,測(cè)定2.6-DPIP 的還原速度,代表SDH 酶活性。

需自備的儀器和用品

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制

試劑一:100mL×1 瓶,-20℃保存;

試劑二:20mL×1 瓶,-20℃保存;

試劑三:1.5mL×1 支,-20℃保存;

試劑四:粉劑×1 瓶,4℃保存;

試劑五:粉劑×1 支,-20℃保存;

樣本的前處理

組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:

1、稱取約0.1g組織或收集500萬(wàn)細(xì)胞,加入1mL試劑一和10uL試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。

2、將勻漿600g,4℃離心5min。

3、棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11000g,4℃離心10min。

4、上清液即胞漿提取物,可用于測(cè)定從線粒體泄漏的SDH(此步可選做)。

5、 在步驟④的沉淀中加入200uL試劑二和2uL試劑三,超聲波破碎, 冰浴,功率20%或200W,超聲3秒,間隔10秒,重復(fù)30次),用于線粒體SDH活性測(cè)定。

測(cè)定步驟和加樣表

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至600nm,蒸餾水調(diào)零。

2、樣本測(cè)定

(1)在試劑四中加入18mL蒸餾水充分溶解,置于37℃(哺乳動(dòng)物)或 25℃(其它物種)水浴10min;用不完的試劑4℃保存一周;

(2)在試劑五中加入1mL蒸餾水,充分溶解待用;用不完的試劑 4℃保存一周;

(3)在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本、10μL試劑五和180μL試劑四,混勻,立即記錄600nm處20s時(shí)的吸光值 A1和1min20s后的吸光值A(chǔ)2,計(jì)算ΔA=A1-A2。

SDH 活性的計(jì)算

a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

(1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。

SDH 活性(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V 樣) ÷T

=952×ΔA÷Cpr

(2) 按樣本鮮重計(jì)算

單位的定義:每g組織每分鐘消耗1nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。

SDH 活性(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W×V樣÷V樣總) ÷T=192×ΔA÷W

(3) 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

單位的定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。

SDH 活性(nmol/min/104cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=0.385×ΔA

V 反總:反應(yīng)體系總體積,2×10 -4 L;ε:2,6-二氯吲哚酚摩爾消光系數(shù),2.1×10 4 L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.01 mL;V 樣總:加入提取液體積,0.202 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500 萬(wàn)。

b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

(1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。

SDH 活性(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T

=1904×ΔA÷Cpr

(2) 按樣本鮮重計(jì)算

單位的定義:每g組織每分鐘消耗1nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。

SDH 活性(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總)÷T=384×ΔA÷W

(3) 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

單位的定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。

SDH 活性(nmol/min/104cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=0.77×ΔA

V 反總:反應(yīng)體系總體積,2×10 -4 L;ε:2,6-二氯吲哚酚摩爾消光系數(shù),2.1×104 L/mol/cm;d:96 孔板光徑,0.5cm;V 樣:加入樣本體積,0.01 mL;V 樣總:加入提取液體積,0.202mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500 萬(wàn)。

 

 

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

ELISA試劑盒免費(fèi)代檢測(cè)

CCK8檢測(cè)

基因組DNA提取

 

蛋白相互作用分析

Western Blot

 

免疫組化

熒光定量PCR

動(dòng)物模型服務(wù)

流式細(xì)胞檢測(cè)

細(xì)胞增殖

激光共聚焦

DNA甲基化實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞劃痕

鈣離子濃度檢測(cè)

掃描電鏡實(shí)驗(yàn)

microRNA 測(cè)序

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

Taqman探針

ATP/ADP檢測(cè)

 

石蠟/冰凍切片

定點(diǎn)突變

線粒體膜電位(MMP)檢測(cè)

細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的測(cè)定

藥理毒理動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

 

免疫共沉淀

真核表達(dá)載體構(gòu)建

染色質(zhì)免疫沉淀CHIP

非標(biāo)定量(Label-free)實(shí)驗(yàn)

會(huì)員登錄

×

請(qǐng)輸入賬號(hào)

請(qǐng)輸入密碼

=

請(qǐng)輸驗(yàn)證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標(biāo)簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時(shí)間回復(fù)您~

以上信息由企業(yè)自行提供,信息內(nèi)容的真實(shí)性、準(zhǔn)確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負(fù)責(zé),化工儀器網(wǎng)對(duì)此不承擔(dān)任何保證責(zé)任。

溫馨提示:為規(guī)避購(gòu)買風(fēng)險(xiǎn),建議您在購(gòu)買產(chǎn)品前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。

撥打電話
在線留言
湟中县| 得荣县| 义马市| 安化县| 黔西| 庄河市| 宣城市| 望都县| 雷州市| 搜索| 永年县| 龙海市| 潼南县| 怀仁县| 黔南| 巫溪县| 儋州市| 龙门县| 廊坊市| 浏阳市| 永丰县| 天祝| 当雄县| 永安市| 平度市| 桂林市| 甘谷县| 汉中市| 乌海市| 称多县| 新安县| 麻阳| 宣恩县| 张掖市| 措美县| 兴业县| 吴堡县| 太湖县| 巫溪县| 肥东县| 东乡县|