會(huì)員.png)
16
當(dāng)前位置：哈美頓（上海）實(shí)驗(yàn)器材有限公司>>技術(shù)文章>>色譜柱的選購(gòu)要考慮哪些要點(diǎn)
色譜柱的選購(gòu)要考慮哪些要點(diǎn)
色譜是一種分離分析手段，分離是核心，因此擔(dān)負(fù)分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對(duì)色譜柱的要求是柱效高、選擇性好，分析速度快等。
選購(gòu)色譜柱一定要認(rèn)真看待，即使都是C18柱，不同品牌、同一品牌不同系列都有不同的功能，有能耐受低pH值的、有耐高溫的、有適合堿性樣品的等等。
原則一：看物理性質(zhì)
柱長(zhǎng)，內(nèi)徑，如250*4.6mm。一般柱長(zhǎng)在2—250mm，柱越長(zhǎng)，分離度越高，但柱壓更高，分離所需時(shí)間更長(zhǎng);但分離度與理論塔板數(shù)的平方根成正比，所以一昧增加柱長(zhǎng)并不是有效的分離手段，一般情況下，150mm、5um的填料可以提供足夠的塔板數(shù)。
粒徑，影響色譜分離度。粒徑越小，分離越快，柱效越高，但柱壓力越高，柱容易被污染，導(dǎo)致柱壽命降低。常見(jiàn)分析柱通常使用5um填料，復(fù)雜的多組分樣品分離一般使用3.5um粒徑，更大內(nèi)徑的制備色譜柱通常使用更大的粒徑。如果固定相選擇是正確，但是分離度不夠，那么選用更小的粒度的填料是很有用的。3.5um填料填充柱的柱效比相同條件下的5um填料的柱效提高近30%;然而，3.5um的色譜柱的背壓卻是5um的2倍，因此如何選擇填料粒徑需要根據(jù)現(xiàn)實(shí)情況而定。
孔徑，60A，100A，120A，300A等?？讖叫?，則含孔率高，比表面積大，載碳量高;色譜柱填料孔徑大小需和分子大小相匹配，保證分子自由進(jìn)出填料孔并與孔內(nèi)表面的鍵合相進(jìn)行分離分配，通常要求孔徑直徑是分子直徑的3倍以上，一般小分子使用80—120A，大分子使用300A。
顆粒形狀，一般有球形和不規(guī)則形，當(dāng)使用黏度較大的流動(dòng)相時(shí)，球形顆?？梢越档椭鶋?，延長(zhǎng)色譜柱壽命。
比表面積，指的是每克填料的表面積，如180m2/g—350m2/g，與粒度和含孔率有關(guān)；比表面積大，會(huì)增加樣品與鍵合相之間的反應(yīng)，增加保留和分離度；比表面積小則可以縮短分析時(shí)間和平衡時(shí)間，并不是比表面積大或者小就更好，需要選擇合適的比表面積。
原則二：看化學(xué)性質(zhì)
硅膠基質(zhì)：通用的基質(zhì)，強(qiáng)度大，化學(xué)修飾容易，但使用的pH值范圍有限(一般為2—8，特殊修飾的可以達(dá)到1—12)。
聚合物基質(zhì)：多為聚苯乙烯—二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂，化學(xué)穩(wěn)定，應(yīng)用pH范圍寬，具有更強(qiáng)的疏水性，對(duì)蛋白質(zhì)等樣品分離效果較好；但強(qiáng)度較小，有機(jī)溶劑可能導(dǎo)致聚合物溶脹而受損，批次重復(fù)性較差，商品化色譜柱不多，一般價(jià)格較貴。
載碳量：基質(zhì)表面鍵合相的比例，載碳量高，則保留增加，適合分析非極性化合物。
鍵合相：鍵合試劑不同，對(duì)化合物的選擇性不同，一般長(zhǎng)鏈的烷基鍵合相(C18 、C8)比短鏈的(C4、 C3)穩(wěn)定；非極性的鍵合相比極性的鍵合相(-NH2)穩(wěn)定。
封端：用短鏈將裸露的硅羥基鍵合后封閉起來(lái)，以減少殘留的硅醇基，減輕待測(cè)組分與酸性硅羥基反應(yīng)而引起的色譜峰拖尾現(xiàn)象。尤其對(duì)于極性樣品而言，未封端處理的色譜柱分離效果較差。
原則三：看正相、反相色譜
| 固定相極性 | 流動(dòng)相極性 | 出峰順序 | |
| 反相吸附色譜 | 非極性 | 強(qiáng)極性（水、甲醇、乙腈等） | 強(qiáng)極性物質(zhì)先出峰 |
| 正相吸附色譜 | 極性 | 弱極性（己烷、庚烷等） | 弱極性物質(zhì)先出峰 |
原則四：根據(jù)柱長(zhǎng)及內(nèi)徑選擇
長(zhǎng)度的選擇：柱越長(zhǎng)，總柱效越高(n值越大)，柱越長(zhǎng)，分析時(shí)間也越長(zhǎng)。250—300mm是普遍的柱長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)室一半以上的工作都是采用此規(guī)格柱子，一般用來(lái)分離l0到50個(gè)組份的中等至復(fù)雜混合物;500—600mm，要求較高分辨率的應(yīng)用，—般用來(lái)分離大于50個(gè)組份或包含有難分離物質(zhì)的復(fù)雜樣品程序升溫分析。
內(nèi)徑：柱效率與柱半徑平方成反比，內(nèi)徑越小柱效越高，但內(nèi)徑越大，柱容量也增加，允許進(jìn)樣量就越多。當(dāng)進(jìn)樣量超過(guò)柱容量時(shí)，則因柱內(nèi)每塊理論板內(nèi)不能建立真正的平衡，將會(huì)導(dǎo)致色譜蜂畸變，柱分辨率降低，重現(xiàn)性不好。因此對(duì)于復(fù)雜樣品需要精確分離，必須使用小內(nèi)徑柱子。另一方面若樣品中存在具有很不相同濃度組份化合物，為了增加樣品容量就必須使用內(nèi)徑大的柱子，目前實(shí)驗(yàn)室使用最常見(jiàn)的柱子內(nèi)徑一般是4.6mm。
一般選擇原則：分析大分子量化合物選擇大孔徑色譜柱；對(duì)于高pH值或者堿性化合物需要選擇高封端或者特殊封端的色譜柱，以改善峰形，延長(zhǎng)色譜柱使用壽命等。