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德國徠卡 共聚焦顯微鏡 STELLARIS  FALCON FLIM 熒光壽命成像顯微鏡

清晰的對比，即時產(chǎn)生壽命成像

德國徠卡 共聚焦顯微鏡 STELLARIS  FALCON FLIM 熒光壽命成像顯微鏡（FAst Lifetime CONtrast，快速壽命對比）是功能成像的未來發(fā)展方向。 利用熒光壽命成像的強大性能來研究細胞生理學并探索活細胞動力學。 STELLARIS FALCON 是一款整合的熒光壽命成像 (FLIM) 解決方案，以視頻速率進行熒光壽命成像來研究活細胞的快速動力學。

STELLARIS  FALCON 為您的成像增加了一個新的對比維度，實現(xiàn)生物傳感以及跟蹤蛋白質(zhì)之間的相互作用。 現(xiàn)在，熒光壽命成像信息可用于STELLARIS 系統(tǒng)的所有模塊。

您現(xiàn)在可以：

通過 FLIM-FRET（熒光共振能量轉(zhuǎn)移）跟蹤分子間的快速相互作用。

使用生物傳感器檢測代謝狀態(tài)和微環(huán)境的變化

通過壽命對比區(qū)分多個熒光團

經(jīng)過簡單的培訓即可獲得熒光壽命成像數(shù)據(jù)

貓眼組織切片。 同時進行的光譜（灰色）和 FLIM（彩色）共聚焦成像顯示了壽命對比情況。 使用 STELLARIS FALCON 和 LAS X 軟件采集和顯示。

通過 FLIM-FRET 跟蹤分子間相互作用

現(xiàn)代科研工作研究分子間如何進行相互作用來完成重要任務。 FLIM-FRET 是探索這種相互作用的金標準。

STELLARIS FALCON 為 FLIM 儀器設定了新的速度標準。

它能在高度動態(tài)的細胞事件中完成熒光共振能量轉(zhuǎn)移 (FRET)實驗。 您可以在日常實驗中采集和分析 FRET 數(shù)據(jù)。

HeLa 細胞中的籠鎖cAMP，表達 EPAC mT2-dVenus FRET 傳感器。 EPAC對紫外線介導的cAMP解籠鎖的反應（中心區(qū)域）。 視頻采集速度4幀/秒。 圖像大?。?256 x256 像素。 顏色條的尺度（壽命）：ns。 由荷蘭阿姆斯特丹癌癥研究所的Kees Jalink和Bram van den Broek提供。

用生物傳感器監(jiān)測細微而快速的變化

生物傳感器是代謝活動、信號傳導機制、酸堿度和微環(huán)境變化的強大報告元件。

STELLARIS  FALCON 可提供熒光壽命中包含的信息，即使在膜電位動力學這類高速事件中也不例外。 這些信息是 STELLARIS 系統(tǒng)提供的光譜熒光強度成像和TauSense模式的有力補充。

用活化肽刺激后的鈣振蕩。 單個細胞中的響應被記錄為壽命變化。 視頻以4 pfs速率拍攝。 圖像大小： 256 x 256個像素。 顏色條的尺度（壽命）：ns。 由荷蘭阿姆斯特丹癌癥研究所的Kees Jalink和Bram van den Broek提供。

更可靠、更靈敏的代謝成像

自發(fā)熒光 在傳統(tǒng)成像中可能是一個問題。 STELLARIS 8 FALCON 可將其轉(zhuǎn)化為有價值的信息。 您現(xiàn)在可以將自發(fā)熒光轉(zhuǎn)化為代謝狀態(tài)、細胞分化和癌癥發(fā)展的報告元件。

此外，STELLARIS FALCON 能夠?qū)罱M織進行成像對比，而熒光標記通常是非特異性的，或者會破壞生理條件。

非生理條件下哺乳動物細胞的自發(fā)熒光 （酸堿度為 8.5）。 信號與內(nèi)源性 NAD/NADH 的變化相關。 氧化應激的發(fā)展表現(xiàn)為熒光壽命隨時間縮短。 原始圖像大?。?512 x 512 像素。 顏色條的尺度（壽命）：ns。

超越光譜選項的熒光基團分離

熒光標記是區(qū)分細胞內(nèi)結(jié)構(gòu)的標準方法。 光譜分離方法非常強大，但有時當發(fā)射光譜太接近時，這個方法就會受到限制。

使用 STELLARIS  FALCON，您可以充分利用熒光壽命成像的潛力，使用指數(shù)擬合、譜圖擬合和新的 FLIM 相量分離分析功能來分離多個熒光探針。

交互式圖像： 通過壽命對比加以區(qū)分的細胞骨架結(jié)構(gòu)。 波形蛋白用Alexa Fluor 555（綠色）免疫標記，微管蛋白用Alexa Fluor 546（藍色）免疫標記。 熒光基團的光譜非常相似，但它們可通過熒光壽命信息區(qū)分。 圖像大?。?512 x 512 像素。

強度FLIM

使用 STELLARIS FALCON 進行快速壽命成像

STELLARIS FALCON 顯微鏡克服了FLIM的速度限制，可快速提供壽命數(shù)據(jù)。

到目前為止，由于FLIM的技術限制，從快速過程的熒光壽命數(shù)據(jù)中獲取功能信息仍有很大難度。 FLIM采集速度比記錄共聚焦強度至少慢10倍。

使用 STELLARIS FALCON 快速熒光壽命對比成像， 您能夠以適當?shù)乃俣雀櫦毎膭討B(tài)過程。 這是因為采用了一種新的時間測量方法，即采用 TCSPC（時間相關單光子計數(shù)）技術和智能的數(shù)據(jù)處理和分析算法。

《自然》網(wǎng)站上的應用指南： SP8 FALCON：熒光壽命成像的新概念，實現(xiàn)視頻速率的共聚焦熒光壽命成像

含有Alexa Fluor 555（綠色）溶液中的熒光珠（品紅色）單通道圖像。 基于熒光壽命的熒光基團分離可以在不同的速度下進行，例如 16幀/秒（上）、27幀/秒（視頻速率，中）和 83幀/秒（超快，下）。 通過壽命信息進行染料分離明顯比強度信息（灰度）更有優(yōu)勢。 視頻展示了壽命組分的逐像素擬合。 幀大小： 512 x 64 像素。 比例尺： 10微米。

一體化的多模態(tài)成像

STELLARIS  FALCON 使 FLIM 與其他模態(tài)的結(jié)合變得十分簡單。 一直以來，研究人員都不得不處理復雜的布線和繁瑣的文件傳輸工作。 使用 STELLARIS  FALCON，您可以將壽命信息整合到標準的共聚焦工作流程中。

STELLARIS  FALCON 可

整合到 LAS X 采集與分析軟件中。 它既可以同時記錄4個光譜通道，又可先后記錄多達10個通道的熒光壽命成像。 使用 STELLARIS FALCON，您能夠在 3D 層掃、延時序列乃至大型拼接成像方式中獲得熒光壽命信息。

使用  LAS X NAVIGATOR，您可以將觀察區(qū)域擴大10,000 倍，更快地識別感興趣的區(qū)域，以全新的方式研究樣本。

輕松采集復雜樣本。 高分辨率小鼠胚胎成像，由包含1.9億像素的722張圖像拼接而成。 通過四個

熒光壽命擬合的FLIM數(shù)據(jù)，彩色編碼。 采集時間： 1小時23分。 分析時間： 1小時

通過相量簡單確定壽命

使用 STELLARIS 8FALCON 的 FLIM 相量圖進行分析，可顯示壽命分量的 2D 圖。 通過 FLIM 相量分析，您可以跟蹤微環(huán)境變化，選擇多路信號的組分來確定 FRET 效率。

Alexa555-鬼筆環(huán)肽和 H2B-mCherry 標記的細胞。 使用 FLIM phasors 執(zhí)行組分離。 相量圖清晰地顯示了兩種壽命分布。 樣本提供方： 德國康斯坦茨大學生物系 Martin St?ckl 博士。

只需點擊一下即可獲得您需要的結(jié)果

使用 LAS X 軟件，只需點擊一下即可獲得熒光壽命成像，方法與常規(guī)光譜成像相同。

即使您將顯微鏡當作一種輔助技術，您也可以找到重要的內(nèi)容，并立即開始成像。

更專業(yè)的功能可作為工作流程提供，為您實現(xiàn)方便的自動化工作。

一鍵式設計，讓您能夠?qū)Ｗ⒂诳茖W研究： 由 LAS X 軟件控制的 STELLARIS  FALCON