一、服務簡介

端粒酶（Telomerase）是由RNA和蛋白質(zhì)組成的一種核糖核蛋白酶。人端粒酶RNA組分(hTR)于1995年被克隆，其中含有端粒重復序列的模板（5’-CUAACCCUAAC-3’）；蛋白質(zhì)組分具有RNA依賴的DNA多聚酶活性。端粒酶能以自身RNA為模板復制合成端粒序列，端粒DNA是一系列重復的富含G的DNA序列，這一序列在生物進化中具有高度的保守型（-TTAGGG-),端粒在保護基因組DNA不被降解、防止染色體有害變異（染色體末端融合、重排、移位和缺失等）起重要作用）。端粒酶的功能包括添加端粒重復序列，端粒長度的穩(wěn)定和維持，以及染色體的整體空間取向、結(jié)構(gòu)完整性和穩(wěn)定性。

在胚性細胞等增殖活躍的細胞中具有端粒酶活性，而在正常成熟體細胞中端粒酶失活，同時還發(fā)現(xiàn)絕大多數(shù)永生性細胞株和腫瘤細胞株都呈端粒酶陽性，而在癌旁組織和正常組織中陽性率則很低，推測端粒酶可能是一個廣泛的腫瘤標志物，端粒酶反應超越了細胞的增殖限制，這可能是惡性腫瘤發(fā)生的一個先決條件。

傳統(tǒng)的端粒酶研究方法是以探針延伸為基礎(chǔ)測定端粒酶活性，需要大量的樣品材料，且檢驗靈敏度受限，直到1994 年kim等采用端粒重復擴增法（Telomeric Repeat Amplification Protocol,TRAP）所取代。標準的TRAP法檢測是通過PCR擴增端粒酶反應的產(chǎn)物，使用放射性標記，經(jīng)凝膠電泳后，通過放射自顯影顯示檢測結(jié)果。該方法相較于傳統(tǒng)的方法，檢測靈敏度有所提升，然而在檢測環(huán)節(jié)仍然操作繁瑣，且結(jié)果判讀存在主觀性。

我公司采用的CELL STR ID®端粒酶TRAP+CE檢測方法，提升了檢測效率（全流程：4-6h），結(jié)果判讀更加自動化和標準化，且檢測靈敏度也有大幅度地提升。

二、服務內(nèi)容

（一）服務流程

（二）服務特點

1．取適量蛋白提取物，參照TRAP 法，對端粒酶底物進行擴增，擴增產(chǎn)物在ABI 3130XL 型遺傳分析儀上進行毛細管電泳檢測和分析。

2．靈敏度高。

3．鑒定報告中文版，以及圖譜（見端粒酶檢測圖譜）。

（三）注意事項

1．樣品寄送：細胞數(shù)量≥10⁶個，1.5ml離心管；干冰運輸。

2．正常檢測周期5-7個工作日。

（四）結(jié)果交付

檢測結(jié)果以電子版的形式發(fā)放到訂單或合同上面預留的郵箱，書面報告可根據(jù)需要隨時提供，寄送到貴單位。

三、檢測端粒酶活性的常用方法：

1、直接檢測端粒酶（蛋白及RNA的結(jié)合復合物）的活性，檢測它是否可以延伸RNA模板，然后跑膠或者探針雜交，檢測端粒cDNA延伸的長度，以此來判斷端粒酶的活性高低。（TRAP法）

不足：經(jīng)典方法，但該方法需要放射性同位素標記及制膠；重復性差、周期長、主觀判讀等。

2、間接檢測端粒酶組分（催化亞基的mRNA量）的表達量。

不足：本質(zhì)是檢測端粒酶的一個組分蛋白TERT的mRNA的表達量, 但是在多數(shù)細胞中，端粒酶催化亞基的表達很難檢測到,且mRNA的表達量并不一定能準確反映端粒酶的活性強度，因端粒酶是一種由RNA及多種蛋白組成的復合物，TERT酶只是其中較為主要的一種蛋白。

四、北京美德華生端粒酶檢測（TRAP+CE）流程：

1 樣本處理：端粒酶提取試劑盒，按照操作說明書，取適量細胞提取蛋白。-80°保存待用。

2 端粒擴增：端粒酶擴增試劑盒，按照操作說明，擴增端粒重復序列。

3 端粒序列檢測：毛細管電泳檢測，按照操作說明進行檢測。

4 端粒擴增產(chǎn)物結(jié)果分析： 按照SOP進行數(shù)據(jù)分析。

5 報告整理：

五、相關(guān)文獻：

1. Telomeres and telomerase: three decades of progress  JW Shay, WE Wright - Nature Reviews Genetics, 2019 - nature.

2. Alternative lengthening of telomeres: Models, mechanisms and implications. Nat Rev Genet. 11:319–330. 2010. View Article : Google Scholar : PubMed/NCBI

3. Telomerase activity concentrates in the mitotically active segments of human hair follicles. J Invest Dermatol. 108:113–117. 1997. View Article : Google Scholar : PubMed/NCBI

4. Detection of telomerase activity in human cells and tumors by a telomeric repeat amplification protocol (TRAP)  Methods in Cell Science 17: 1-15, 1995